一、細(xì)胞種屬鑒定服務(wù)簡介

細(xì)胞系作為正?；蚰[瘤組織的模式細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究和藥物開發(fā)，然而很大一部分的細(xì)胞系被錯(cuò)誤標(biāo)記或被其它個(gè)體、組織、種系來源的細(xì)胞所替代，由于科學(xué)界無法解決此類問題以致大量因使用錯(cuò)誤鑒定的細(xì)胞系而導(dǎo)致誤導(dǎo)或存在潛在錯(cuò)誤的學(xué)術(shù)論文發(fā)表。

培養(yǎng)物的交叉污染以及隨后污染細(xì)胞的過量生長是另一個(gè)引起細(xì)胞系錯(cuò)誤鑒定的常見原因。這種情況發(fā)生的幾率在以下條件會(huì)增加：試劑的共用、操作時(shí)反復(fù)使用相同的未經(jīng)徹D消毒和清場的工具及設(shè)備、在沒有充分分離每一細(xì)胞類型情況下同時(shí)對多個(gè)培養(yǎng)物進(jìn)行操作。當(dāng)交叉污染發(fā)生時(shí)，一種細(xì)胞類型迅速生長而超過另一種，在4-5次細(xì)胞傳代后，一個(gè)純的污染細(xì)胞培養(yǎng)物將會(huì)形成。

在使用其它物種的滋養(yǎng)層（例如小鼠3T3細(xì)胞）來繁殖人類干細(xì)胞或原始細(xì)胞時(shí)有意地共培養(yǎng)會(huì)導(dǎo)致交叉污染或人類細(xì)胞系過生長。正常情況下，滋養(yǎng)層細(xì)胞處于無增殖狀態(tài)，但只要生長抑制程序不w全，它就會(huì)不斷繁殖并逐步取代人類細(xì)胞。體細(xì)胞雜交雖不常見但也會(huì)發(fā)生，如人類套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系NCEB-1就攜帶了小鼠的七條染色體。

異種移植也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞系交叉污染和錯(cuò)誤鑒定，來自異種移植的復(fù)蘇細(xì)胞會(huì)被宿主動(dòng)物細(xì)胞所替代。

一般而言，交叉污染最終的結(jié)果將會(huì)是少量適應(yīng)細(xì)胞且快速的替代。兩個(gè)細(xì)胞系不能持續(xù)共存于同一個(gè)培養(yǎng)環(huán)境，除非它們是共生關(guān)系，但這種情況據(jù)我們所知還未有報(bào)道。一個(gè)細(xì)胞群經(jīng)過許多次傳代后還能包含一個(gè)穩(wěn)定的混合基因組，唯Y已知的情況是體細(xì)胞雜交。

通過對細(xì)胞錯(cuò)誤識(shí)別和交叉污染長達(dá)50年的追蹤和研究，STR分型方法已成為對人源細(xì)胞和小鼠細(xì)胞進(jìn)行鑒定的標(biāo)準(zhǔn)方法，然而該方法的弊端是不能進(jìn)行其他物種的鑒定，并無法識(shí)別不同物種間的交叉污染。

美德華生細(xì)胞種屬鑒定：我公司CELL STR ID®細(xì)胞種屬鑒定及種間交叉污染質(zhì)控檢測體系,通過對人、小鼠、大鼠、非洲綠猴、倉鼠、豬、狗、牛、羊、兔等10種種屬特異性基因COI進(jìn)行特異探針序列設(shè)計(jì)，并進(jìn)行同時(shí)擴(kuò)增和檢測，因每種種屬的特異基因片段大小特異，通過判斷各自特異性序列是否擴(kuò)增以及出現(xiàn)的片段大小就可以判斷待檢樣本是否特定種屬以及是否有多種種屬DNA共存。通過該體系檢測只需要單次實(shí)驗(yàn)就可以快速判斷待檢細(xì)胞樣本是否人源或其它種屬DNA或多種屬DNA交叉污染。

提供細(xì)胞及其制劑的同源性質(zhì)控及交叉污染監(jiān)控服務(wù)，只為細(xì)胞可靠身份放行。

用種屬熒光復(fù)合引物 MIX 對動(dòng)物線粒體 COI 基因進(jìn)行擴(kuò)增（參考文獻(xiàn)：Species identification in cell culture: a two-pronged molecular approach， In Vitro Cellular & Developmental—Animal (2007)。

二、細(xì)胞種屬鑒定服務(wù)內(nèi)容

（一）細(xì)胞種屬鑒定服務(wù)流程

（二）細(xì)胞種屬鑒定服務(wù)特點(diǎn)

1．用種屬熒光復(fù)合引物 MIX 對動(dòng)物線粒體 COI 基因進(jìn)行擴(kuò)增、擴(kuò)增產(chǎn)物在 ABI 3130XL 型遺傳分析儀上進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測和分析。

2．靈敏度高。可以鑒別細(xì)胞樣本中含有的少量人、小鼠、大鼠、非洲綠猴、倉鼠、豬、狗、牛、羊、兔等10種種屬細(xì)胞污染，檢測線為皮克級(jí)。

3．參考國際細(xì)胞鑒定委員會(huì)（ICLAC）發(fā)布的動(dòng)物細(xì)胞種屬鑒定標(biāo)準(zhǔn)（ASN-0003）。

4．鑒定報(bào)告中文版或中英版（自選），以及圖譜（見細(xì)胞種屬鑒定檢測圖譜）。

（三）細(xì)胞種屬鑒定注意事項(xiàng)

1．樣品寄送：用戶提供DNA或細(xì)胞 樣本，加冰袋運(yùn)輸；同時(shí)請注明細(xì)胞數(shù)量或DNA含量，DNA 含量大于50ng/μl，體積大于20μl。如提供細(xì)胞，請?zhí)峁㏄BS細(xì)胞懸浮液，離心沉淀，去上清液，可常溫特快專遞運(yùn)輸（京外客戶推薦方法）；細(xì)胞數(shù)量≥10⁶個(gè)。

2．正常檢測周期5-7個(gè)工作日，加急2-3個(gè)工作日。

3．本單位所提供的細(xì)胞種屬鑒定可分為科研級(jí)，工業(yè)級(jí)?？蒲袡z測：遵循ISO17025原則，樣本、數(shù)據(jù)長期保存，不支持現(xiàn)場審查；工業(yè)級(jí)：遵循ISO17025原則，樣本、數(shù)據(jù)長期保存，支持現(xiàn)場審查。

（四）細(xì)胞種屬鑒定結(jié)果交付

檢測結(jié)果以電子版的形式發(fā)放到訂單或合同上面預(yù)留的郵箱，書面報(bào)告可根據(jù)需要隨時(shí)提供，寄送到貴單位。

三、細(xì)胞種屬鑒定結(jié)果解釋：

1、參考國際細(xì)胞鑒定委員會(huì)（ICLAC）發(fā)布的動(dòng)物細(xì)胞種屬鑒定標(biāo)準(zhǔn)（ASN-0003）Species-Level Identification of  Animal Cells through Mitochondrial Cytochrome c Oxidase Subunit 1 (CO1) DNA Barcodes。

2、內(nèi)參基因與特定種屬均有擴(kuò)增特異峰，表示該樣本為特定種屬。若出現(xiàn)多個(gè)種屬均由特異擴(kuò)增峰，則提示該樣本有多種不同種屬DNA存在。

四、種屬復(fù)合擴(kuò)增MIX表

五、種屬鑒定及種間交叉污染質(zhì)控檢測圖譜及參考文獻(xiàn)

參考文獻(xiàn)：

4.1、 Capes-Davis, A., Theodosopoulos, G., Atkin, I., et al. (2010) Check your cultures! A list of cross-contaminated or misidentified cell lines. Int. J. Cancer 127 (1), 1?8

4.2、Cell Lines as Biological Models: Practical Steps for More Reliable Research

4.3、Cases of Mistaken Identity   2007

4.4、ATCC SDO Workgroup ASN-0002 (2010) Cell line misidentification: the beginning of the end.