人β淀粉樣蛋白40（Aβ40）ELISA試劑盒說明書（定量）

使用前請仔細閱讀說明書。如果有任何問題，請聯(lián)系我們,我們會給你提供專業(yè)的技術服務。

【產品名稱】

通用名稱：人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)檢測試劑盒（ELISA）

英文名稱：Human（Aβ42）ELISA KIT

【包裝規(guī)格】

96人份/盒

【預期用途】

僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液等相關樣本中人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)的濃度。

【檢測原理】

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)水平。用純化的人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)，再與HRP標記的人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)濃度。

【試劑盒組成】

注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標簽和數(shù)量與表格是否一致

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動洗板機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一次性乳膠手套

【儲存條件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。

  2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

【適用儀器】

  半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產酶標儀。

【樣本要求】

1.樣本類型和采集

血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
    血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注意：檢測前，樣本中可見的沉淀必須去除。不要使用嚴重溶血或高血脂的樣本。 樣本應分裝并貯存于-20℃，以避免人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)活性的丟失。如果在 24 小時內檢測，樣本可以 存放在 2 - 8℃。 避免樣本的反復凍融。在檢測前，冷凍樣本應該緩慢地恢復至室溫，輕柔地混勻。

2.樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【人β淀粉樣蛋白40（Aβ40）ELISA試劑盒操作步驟】

• 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

• 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

【操作程序總結】

【結果計算】

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

【產品性能指標】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。

2、劑量反應曲線線性

標準品劑量反應曲線相關系數(shù)r值，大于等于0.9900。

3、精密度

批內精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在同一個板塊內精度評估。批內變異系數(shù)CV%小于10%。

批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在不同板塊內精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于15%。

4、檢測范圍

6μg/L -160μg/L 。

5、靈敏度

低檢出劑量小于1.5μg/L。

6、回收率

三組已知的高、中、低濃度樣品，進行五次回收率評估，回收率在85%-115%之間。

7、特異性

本試劑盒識別天然和重組人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)，與結構類似物無交叉。

8、穩(wěn)定性

2℃-8℃保存，有效期6個月。

【注意事項】

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間Best控制在5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

• 請每次測定的同時做標準曲線，Best做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔First孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
• 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

【常見問題及解決方法】

若實驗效果不好，請及時對顯色結果拍照，保存實驗數(shù)據(jù)，保留所用板條及未使用試劑，然后 聯(lián)系我公司技術支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料：

【生產企業(yè)】

企業(yè)名稱：上海恒遠生物科技有限公司

地    址：上海市閔行區(qū)閔北路88弄1-17號、18-30號第12幢168室