油紅O脂肪染色法是指在日常病理診斷和科研工作中為了顯示組織內的脂肪常采用油紅O進行染色的方法,油紅O為脂溶性染料,在脂肪內能高度溶解,可特異性的使組織內甘油三酯等中性脂肪著色。
在病理檢驗中,脂類染色法常用以證明脂肪變性,脂肪栓子以及腫瘤的鑒別。脂類染色使用廣泛的染料是蘇丹染料,常用的有蘇丹Ⅲ,蘇丹Ⅳ,蘇丹黑及油紅O等。蘇丹類的油紅O染料在脂類中的溶解度大于在有機溶劑的溶解度,所以染色時染料便從染液中轉移到被染的脂質中去,使脂質顯現出紅色。經研究認為組織中脂質在液態(tài)或半液態(tài)時,對蘇丹染料著色效果好。根據這一原理,適當提高溫度(37℃-60℃)對組織切片染色效果是有好處的。
實驗流程:
1、 固定:將冰凍切片復溫干燥10min;細胞爬片4%多聚甲醛固定15min,PBS漂洗3次,5min/次。
2、 染色:入油紅O工作液孵育10-15min;細胞爬片破膜10-15min,PBS漂洗3次,5min/次,入油紅O工作液37°染色1-2h。
3、 分化:75%酒精分化2s,水洗1min。
4、 復染細胞核:Harris蘇木素復染1-2min左右,自來水洗,1%的鹽酸酒精分化數秒,自來水沖洗,氨水返藍,流水沖洗。
5、 封片:用紙巾吸去周邊水分,甘油明膠封片。染色結果:脂滴呈橘紅色至鮮紅色,細胞核藍色。
實驗結果展示:
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