等度液相色譜分析儀是一種常用的液相色譜分析儀器,其工作原理是基于不同物質在固定相和流動相之間的分配系數(shù)不同而實現(xiàn)分離的。在分離過程中,流動相攜帶樣品通過色譜柱,樣品中的各組分在色譜柱上發(fā)生吸附、解吸、擴散等過程,從而實現(xiàn)分離。分離后的組分依次進入檢測器,檢測器將其轉化為電信號,最后由數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進行處理和分析。
等度液相色譜分析儀主要由輸液泵、檢測器、色譜柱、進樣系統(tǒng)以及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分組成。其中,輸液泵負責提供穩(wěn)定、精確的流動相;檢測器用于檢測樣品組分;色譜柱則是分離樣品的關鍵部件;進樣系統(tǒng)負責將樣品注入色譜柱;數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)則負責收集、處理和分析檢測數(shù)據(jù)。
等度液相色譜分析儀在使用過程中,需要注意以下事項:
1、流動相選擇與處理
選擇合適試劑:流動相應選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水,酸堿液及緩沖液需經過濾后使用。
定期更換:水相流動相需經常更換(一般不超過2天),防止長菌變質。
正確放置:使用雙泵時,若所用流動相中有含鹽流動相,則A、D(進液口位于混合器下方)放置含鹽流動相,B、C(進液口位于混合器上方)放置不含鹽流動相。
2、樣品準備與處理
過濾與離心:采用過濾或離心方法處理樣品,確保樣品中不含固體顆粒。
溶劑制備:用流動相或比流動相弱(若為反相柱,則極性比流動相大;若為正相柱,則極性比流動相?。┑娜軇┲苽錁悠啡芤?,盡量用流動相制備樣品液。
3、儀器操作與維護
啟動順序:先開高壓恒流泵和紫外檢測器,待紫外檢測器自檢完畢,回到默認波長254nm后,打開工作站軟件。
關閉順序:先按泵停止,關閉氘燈,退出工作站軟件,然后再關儀器。
管路連接:將管子完q插入開口端,直至其與開口端的末端相碰為止,避免產生死體積。
日常維護:保持流動相儲液器的清潔,使用HPLC級的溶劑,對試劑含有緩沖鹽及非HPLC級的流動相一定要用0.5μm過濾器除去其中的微粒物質。
4、安全注意事項
安裝條件:實驗臺應水平、穩(wěn)固,并具有足夠的放置空間;避免在具有腐蝕性氣體、大量灰塵或能產生強磁場的地方安裝本儀器。
通風要求:由于儀器所用溶劑是易燃并且有毒,故安裝設備的房間應徹d通風,且具有向外排風的裝置。
電源要求:必須安裝四個以上三芯電源插座(220V 5~10A),并確保儀器電源的電壓穩(wěn)定在交流(220±22)V。
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