細胞老化的形態(tài)和分子生物學變化

1、顯微鏡下觀察，老化的細胞通常會在細胞內部出現(xiàn)空泡（可能是凋亡小體）。但是，需要區(qū)分的是，部分細胞本身會有少量空泡，對于這些細胞，要每天觀察，注意細胞空泡是否增多。

2、顯微鏡下，也可能會觀察到更多的黑點，大多沿細胞周邊排布，細胞內部也可能會出現(xiàn)一些，但相對周邊為少。

3、老化以后的細胞會出現(xiàn)立體感慢慢消失，開始成扁平狀，這是因為細胞的折光性變差，顯微鏡下可以直觀地觀察到細胞“變薄”。

4、細胞與細胞之間的間隔減小或混在一起，細胞不再是梭形，而會成為各種不規(guī)則形狀。

5、如果是貼壁細胞，會發(fā)現(xiàn)細胞的貼壁性減弱，開始有細胞漂浮于培養(yǎng)液中。

6、老化的細胞，表面分泌物會增多，細胞表面的純凈度越來越低，不再保持透亮。

7、細胞的增殖速度顯著降低，細胞活力變弱。

8、有些細胞在正常培養(yǎng)的條件下，也會開始長角，即發(fā)生了細胞分化。

9、由于細胞周期中斷和DNA復制停止，老化細胞內的DNA含量與正常細胞類似，但細胞內的RNA與蛋白質豐度均比正常細胞要明顯升高。這是由于，

雖然細胞進入老化階段后蛋白質的整體合成速率降低，但是蛋白質的降解體系受到更加明顯的抑制，導致蛋白質在細胞內持續(xù)堆積。

最后，需要強調的是：由于不同組織來源的細胞，其形態(tài)本就各不相同，因此目前還沒有一個客觀的、統(tǒng)一的標準從細胞形態(tài)判斷并定義老化細胞。

因此，在細胞培養(yǎng)的過程中，持續(xù)觀察細胞，關注細胞的變化，是一位細胞培養(yǎng)員的重要工作內容。

 什么是細胞老化？

1.防止細胞老化最主要還是要做到勤觀察、勤換液、勤傳代、勤保種，特別是傳代，不能等細胞太密了之后傳，一般細胞建議長到80％~90%融合度傳代最好；

2.換培養(yǎng)液頻率與培養(yǎng)的細胞種類直接相關，建議新手培養(yǎng)員在培養(yǎng)每一種細胞時，多多咨詢有經驗的同學、技術員等，同時在實際操作的過程中積累經驗，形成自己的最佳培養(yǎng)體系；

3.選擇可靠且穩(wěn)定的血清和培養(yǎng)基至關重要：血清和培養(yǎng)基直接為細胞提供生長所需的營養(yǎng)，它們直接關系到細胞的生長狀況。務必挑選適宜的血清，否則由于營養(yǎng)成分不均衡，可能導致細胞提前老化。

此外，一個穩(wěn)定的培養(yǎng)基同樣是培養(yǎng)細胞的關鍵因素。

4.在培養(yǎng)大部分貼壁細胞時，消化步驟不可避免，但是消化對細胞的表面蛋白質有一定的破壞作用，因此不能長時間進行消化并且在選擇消化酶時也要選擇較為合適的pH和濃度，不然就會使細胞老化或者分化；

5.在著手培養(yǎng)細胞并進行傳代的同時，及時進行細胞的凍存工作至關重要，以確保細胞種子庫的持續(xù)存在，這能有效預防細胞事故導致實驗室中某一株細胞絕種。盡管老化細胞不會即刻消亡，但它們的基因表達模式會經歷變化，

可能會對生物實驗的結果產生較大影響。如果發(fā)現(xiàn)正在培養(yǎng)的細胞老化嚴重，建議從種子庫或工作庫中重新復蘇細胞。