前  言

免疫原性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是生物藥物開(kāi)發(fā)的重要組成部分。多特異性抗體在治療方面表現(xiàn)出特異性好、選擇性好等特性，但由于其結(jié)構(gòu)組成、大小、是否含有Fc及靶點(diǎn)結(jié)合親和力等因素，容易產(chǎn)生免疫原性，且風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估挑戰(zhàn)大。

01多特異性抗體的免疫原性來(lái)源

序列注意事項(xiàng)

氨基酸序列和T細(xì)胞表位含量是產(chǎn)生免疫反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)的主要因素。多特異性療法采用多種蛋白質(zhì)工程技術(shù)，以非天然方式將特定的結(jié)構(gòu)域匯集在一起，以便同時(shí)進(jìn)行多靶點(diǎn)識(shí)別，例如knobs-in-holes、CrossMAb、Triomab、SEED、CODV、DART®、TRIDENT、BiTE®、BiKE、TriKE、MATCH、nanobody、diabody、diabody-Ig等。

這類(lèi)設(shè)計(jì)和優(yōu)化的單價(jià)或多價(jià)的抗體藥可能會(huì)增加抗體分子的免疫原性。例如，使用抗體片段和接頭分子可能導(dǎo)致產(chǎn)生全長(zhǎng)親本抗體中不存在的新表位，或暴露隱藏在親本抗體結(jié)構(gòu)中的隱藏表位。與親本抗體相比，這些表位可能會(huì)增加雙特異性抗體的免疫原性風(fēng)險(xiǎn)。

關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）

CQA風(fēng)險(xiǎn)因素也與多特異性抗體相關(guān)，如蛋白質(zhì)聚集體、翻譯后修飾、宿主細(xì)胞和工藝相關(guān)雜質(zhì)（如HCP、HCD、內(nèi)毒素、色譜樹(shù)脂、污染物和降解物等）、制劑賦形劑和容器封閉等。鑒于多特異性抗體分子中不同功能域的非天然排列，與靶蛋白可能形成大型復(fù)合物，導(dǎo)致免疫原性風(fēng)險(xiǎn)增加。如ABT-122和JNJ-61178104是在阿達(dá)木單抗（TNF-α，三聚體）骨架上添加IL-17A結(jié)合域（IL-17A，二聚體）的雙抗。在健康志愿者研究中，發(fā)現(xiàn)ABT-122和JNJ-61178104 的ADA發(fā)生率分別為99%和99.99%。

免疫調(diào)節(jié)  

多特異性療法關(guān)于免疫調(diào)節(jié)數(shù)據(jù)在不斷增加，免疫原性風(fēng)險(xiǎn)因素逐漸成為關(guān)鍵因素。如藥物分子是否涉及多個(gè)免疫檢查點(diǎn)的拮抗作用？是否結(jié)合B細(xì)胞？是否涉及免疫檢查點(diǎn)激動(dòng)作用？nivolumab單一治療時(shí)ADA體發(fā)生率為11.2%，nivolumab與ipilimumab聯(lián)合治療時(shí)ADA躍升至37.8%。CD3是橋聯(lián)細(xì)胞的常用靶點(diǎn)，而CD3的結(jié)合似乎容易產(chǎn)生ADA反應(yīng)，如otelixizumab或teplizumab。此外，靶蛋白為多聚體膜蛋白的抗體分子，可介導(dǎo)細(xì)胞表面的復(fù)合物形成。當(dāng)這些靶點(diǎn)在抗原呈遞細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，可以促進(jìn)復(fù)雜的攝取并增加T細(xì)胞介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。

02多特異性抗體生物分析策略

多特異性抗體藥物較傳統(tǒng)單抗藥物更為復(fù)雜，整合PK、ADA和PD數(shù)據(jù)有助于了解免疫原性的臨床影響。運(yùn)用科學(xué)和戰(zhàn)略性的判斷非常重要，需要充分考慮測(cè)定形式、樣品收集的預(yù)分析以及靶標(biāo)和治療方法的潛在生物學(xué)。

藥代動(dòng)力學(xué)PK

 一般多特異性抗體藥物PK方面的要求與單抗藥物相同，但需要對(duì)其固有特性予以特殊考慮。如用競(jìng)爭(zhēng)的抗獨(dú)-特型抗體或靶點(diǎn)蛋白只能檢測(cè)同時(shí)具有未占據(jù)的抗TNF-α和未占據(jù)的抗IL-17A的完-全游離抗體分子。還需要額外檢測(cè)游離adalimumab或游離IL-17A結(jié)合域，可以用兩種靶點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng)型抗獨(dú)-特型抗體與非競(jìng)爭(zhēng)型抗獨(dú)-特型抗體配對(duì)，分別檢測(cè)兩種游離形式的分子。

抗藥抗體ADA

與PK生物分析策略考慮類(lèi)似，多特異性抗體免疫原性測(cè)定的選擇和開(kāi)發(fā)，也應(yīng)在藥物開(kāi)發(fā)階段進(jìn)行適當(dāng)?shù)目茖W(xué)和戰(zhàn)略性思考。橋接法測(cè)定ADA可以檢測(cè)不同結(jié)合親和力水平和不同亞型的ADA，但這需要所檢測(cè)的樣本具有高Ctrough。另外，方法學(xué)開(kāi)發(fā)要充分掌握靶點(diǎn)特點(diǎn)和藥物結(jié)構(gòu)。通常基于細(xì)胞的抗藥物中和抗體 (nAb)評(píng)估被認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn)。如HC-12的整個(gè)臨床開(kāi)發(fā)過(guò)程中評(píng)估nAb很重要，但我們建議不要開(kāi)發(fā)專(zhuān)門(mén)的中和抗體檢測(cè)方法。相反，一種利用游離PK、PD和ADA等測(cè)定數(shù)據(jù)整合方法，比使用獨(dú)立的nAb測(cè)定更具信息價(jià)值。FDA指南指出，以數(shù)據(jù)整合方法判斷ADA中和活性具有潛力。

藥效PD

就HC-12而言，基于治療藥物的作用機(jī)制，適當(dāng)PD評(píng)估可能包括循環(huán)系統(tǒng)中游離TNF-α和IL-17A細(xì)胞因子以及自身免疫性疾病標(biāo)志物的定量檢測(cè)。雖然更具挑戰(zhàn)性和復(fù)雜性，但其PD評(píng)估可能包括TNF-α、IL-17A通路特異性細(xì)胞應(yīng)答?；诩僭O(shè)，這種PD生物標(biāo)志物應(yīng)該可以很好地跟蹤藥物濃度水平，并且以足夠靈敏檢測(cè)nAb反應(yīng)。

以上研究案例說(shuō)明充分了解藥物和靶標(biāo)的潛在四級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)于多特異性抗體藥物研究尤為重要。這些結(jié)構(gòu)可能形成大型免疫復(fù)合物來(lái)增加免疫原性發(fā)生率。對(duì)于多特異性療法，在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中考慮藥理學(xué)對(duì)免疫原性的潛在影響至關(guān)重要。

?抗獨(dú)-特型抗體技術(shù)服務(wù)

義翹神州有多種方案可以解決抗獨(dú)-特型抗體開(kāi)發(fā)中遇到的難點(diǎn)問(wèn)題，可以提供從抗原制備、抗獨(dú)-特型抗體開(kāi)發(fā)到檢測(cè)方法建立、試劑盒開(kāi)發(fā)的全-套-服務(wù)。

抗獨(dú)-特型抗體制備服務(wù)

豐富的抗原酶切經(jīng)驗(yàn)：全長(zhǎng)抗體、雙特異抗體、Fc融合蛋白等多類(lèi)型抗原酶切及純化經(jīng)驗(yàn)

免疫原類(lèi)別多樣性：全長(zhǎng)抗體、F(ab')2 、Fab、ADC偶聯(lián)抗體藥、雙抗等

多種屬選擇：鼠、兔多種純化方式：Protein A、抗原親和、總?cè)薎gG、同型IgG

多種免疫方案，提高效價(jià)及篩選成功率

純化抗體高效價(jià)、高特異性、人IgG低交叉

99.99%成功率，客戶(hù)遍布中外

血藥濃度檢測(cè)服務(wù)

單抗藥物和蛋白類(lèi)藥物血藥濃度測(cè)定方法建立、驗(yàn)證及相應(yīng)試劑盒開(kāi)發(fā)生產(chǎn)。

免疫原性研究服務(wù)

分析方法設(shè)計(jì)、建立、驗(yàn)證及試劑盒生產(chǎn)。

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