在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，多色熒光免疫組化(mIHC)和多色流式(FCM)是兩種重要的技術(shù)，它們?cè)跈z測(cè)和分析生物樣本方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。盡管它們都涉及到熒光標(biāo)記和多色分析，但它們的原理、樣本選擇、應(yīng)用和優(yōu)勢(shì)卻有著明顯的區(qū)別。本文將為您詳細(xì)解析這兩種技術(shù)的不同之處。

原理與特點(diǎn)

多色熒光免疫組化技術(shù)(mIHC)，也稱為酪氨酸信號(hào)放大(TSA)技術(shù)，是一種基于酪胺信號(hào)放大的多重順次免疫染色技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)利用辣根過(guò)氧化酶(HRP)對(duì)靶蛋白或核酸進(jìn)行高密度原位標(biāo)記，允許同時(shí)檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞或組織樣本上的多個(gè)目標(biāo)靶點(diǎn)。mIHC技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于其原位展示和定量分析的雙重能力，能夠全面研究細(xì)胞組成、功能和細(xì)胞間相互作用。

多色流式技術(shù)，即流式細(xì)胞術(shù)(FCM)，是一項(xiàng)集激光技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、流體力學(xué)以及細(xì)胞免疫熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技細(xì)胞分析技術(shù)。FCM通過(guò)激光光源激發(fā)細(xì)胞上所標(biāo)記的熒光物質(zhì)的強(qiáng)度和顏色以及散射光的強(qiáng)度，對(duì)粒子進(jìn)行多參數(shù)分析，包括粒子形狀和大小、細(xì)胞周期、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子、細(xì)菌表面抗原、細(xì)胞DNA內(nèi)含物等。

樣本要求

多色熒光免疫組化技術(shù)(mIHC)樣本要求：

1、樣本類型：mIHC通常使用福爾馬林固定的蠟塊或玻片，包括大塊組織或組織芯片(TMA)。

2、組織固定：組織應(yīng)使用10%中性福爾馬林/多聚甲醛固定，正常固定時(shí)間為18-24h。

3、切片厚度：切片厚度約為4微米，使用防脫玻片。

4、樣本保存：盡量選擇相對(duì)較新的樣本（一個(gè)月內(nèi)），最長(zhǎng)不要超過(guò)半年，以免靶點(diǎn)缺失或強(qiáng)非特異性導(dǎo)致染色效果不佳。

5、組織處理：取新鮮組織后迅速轉(zhuǎn)移到固定液中，固定后浸蠟溫度應(yīng)控制在58~60℃左右。

6、玻片要求：組織需要緊貼玻片，避免褶皺，玻片不能有破損、劃傷或污漬。

多色流式(FCM)樣本要求：

1、樣本類型：FCM需要單細(xì)胞懸液。外周血或懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞可以直接制備成單細(xì)胞懸液，而貼壁細(xì)胞、實(shí)體組織或腫瘤組織需要先制備成單細(xì)胞懸液。

2、細(xì)胞活性：FCM檢測(cè)的樣本需要是活細(xì)胞，尤其是經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)輸和儲(chǔ)存的樣本，死細(xì)胞對(duì)許多抗體有非特異性染色，因此細(xì)胞活性檢測(cè)非常重要。

3、樣本保存：理想狀態(tài)下，樣本應(yīng)在采集后立刻進(jìn)行處理和染色。不同類型的抗凝劑對(duì)應(yīng)的保存時(shí)間不同，例如肝素抗凝的血和骨髓可保存至48-72h/室溫。

4、紅細(xì)胞去除：在進(jìn)行FCM分析前，可能需要去除紅細(xì)胞，常用的方法包括紅細(xì)胞裂解法和密度梯度離心法。

5、細(xì)胞與抗體比例：需要根據(jù)不同樣本調(diào)整細(xì)胞與抗體的比例，以得到最適的細(xì)胞/抗體比例。

應(yīng)用和優(yōu)勢(shì)

mIHC技術(shù)在腫瘤微環(huán)境、腫瘤免疫浸潤(rùn)、細(xì)胞衰老/凋亡/鐵死亡/細(xì)胞自噬等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。它能夠通過(guò)定量病理分析獲得組織細(xì)胞原位各種靶標(biāo)類別、組分、表達(dá)量等信息，以及各靶標(biāo)及其相互作用的空間定位、定性和定量等信息。

1、腫瘤微環(huán)境研究：mIHC技術(shù)可以同時(shí)獲取組織的腫瘤標(biāo)記物、細(xì)胞狀態(tài)、免疫細(xì)胞分型、免疫調(diào)控、間質(zhì)細(xì)胞等信息，對(duì)腫瘤免疫特征的全貌進(jìn)行分析。例如，在腫瘤免疫浸潤(rùn)和趨化因子受體表達(dá)研究中，mIHC技術(shù)能夠展示不同細(xì)胞之間的原位相互作用，這對(duì)于理解腫瘤微環(huán)境及藥效評(píng)估尤為重要。

2、腫瘤免疫治療藥效評(píng)估：mIHC在評(píng)估抗PD-1/PD-L1治療反應(yīng)中顯示出更高的準(zhǔn)確性。相比于單指標(biāo)IHC、TMB和GEP等評(píng)估方式，mIHC方法預(yù)測(cè)抗PD-1/PD-L1治療的反應(yīng)更準(zhǔn)確，提供了更高的曲線下面積(AUC)。

3、減少組織樣本損耗：mIHC技術(shù)可以在單個(gè)切片中標(biāo)記多個(gè)標(biāo)志物，減少樣本損耗，特別適用于臨床珍貴樣本或穿刺等小組織量樣本。

FCM技術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。它能夠進(jìn)行細(xì)胞大小、細(xì)胞顆粒度、DNA及RNA含量、蛋白質(zhì)含量、細(xì)胞特異抗原、細(xì)胞活性、胞內(nèi)PH值、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞功能分析等的檢測(cè)。

多色流式(FCM)的應(yīng)用：

1、腫瘤細(xì)胞參數(shù)檢測(cè)：FCM可以檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的增殖活性標(biāo)志分子、分化/凋亡標(biāo)志分子等，用于研究腫瘤的發(fā)病機(jī)制、制定個(gè)性化治療方案以及進(jìn)行預(yù)后判斷。例如，通過(guò)FCM檢測(cè)細(xì)胞DNA含量，可以作為細(xì)胞發(fā)生癌變或具有惡性潛能的癌前病變的重要標(biāo)志。

2、微小殘留病變(MRD)監(jiān)測(cè)：FCM在惡性血液病MRD監(jiān)測(cè)中具有高敏感性和特異性，已成為臨床療效觀察和預(yù)后分層的重要依據(jù)。

3、腫瘤免疫狀態(tài)評(píng)估：FCM通過(guò)TBNK分析精準(zhǔn)評(píng)估腫瘤患者的免疫狀態(tài)，有助于早期診斷惡性腫瘤，進(jìn)而為患者后續(xù)的治療提供指導(dǎo)和依據(jù)。

總結(jié)

總的來(lái)說(shuō)，mIHC和FCM在生物醫(yī)學(xué)研究中扮演著不同的角色。mIHC技術(shù)側(cè)重于組織層面的多靶點(diǎn)分析，強(qiáng)調(diào)原位展示和定量分析，適用于研究細(xì)胞組成、功能和相互作用。而FCM技術(shù)則側(cè)重于單個(gè)細(xì)胞的多參數(shù)分析，適用于細(xì)胞生物學(xué)和免疫學(xué)等領(lǐng)域的研究。了解這兩種技術(shù)的區(qū)別，可以幫助科研人員根據(jù)研究需求選擇合適的技術(shù)平臺(tái)。

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爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè))；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

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