液相色譜儀的使用教程

液相色譜儀的使用教程詳細步驟如下：

一、開機前準備

1.流動相準備：

根據(jù)實驗需求選擇合適的流動相，如甲醇、乙腈、水等，以及相應(yīng)的添加劑（如緩沖鹽等）。

使用合適的濾膜（有機系或水系，常用孔徑為0.20μm或0.45μm）對流動相進行過濾，以去除雜質(zhì)。

對過濾后的流動相進行超聲脫氣10~20分鐘，去除溶解在其中的氣體，防止在儀器中形成氣泡影響分析結(jié)果。

2.樣品準備：

確保樣品溶解均勻且無雜質(zhì)。如果樣品是固體，需要將其溶解在合適的溶劑中；如果樣品是液體，需要進行適當?shù)南♂尰蚯疤幚怼?/p>

3.色譜柱選擇：

根據(jù)樣品的性質(zhì)和分析目的選擇合適的色譜柱。例如，對于極性較大的樣品，可選擇反相色譜柱（如C18柱）；對于極性較小的樣品，正相色譜柱可能更合適。

注意色譜柱的規(guī)格（如長度、內(nèi)徑、粒徑等）對分離效果的影響。

二、開機

1.打開硬件設(shè)備：先打開計算機，進入操作系統(tǒng)后，再打開液相色譜儀的各個模塊電源，如泵、檢測器、柱溫箱等。

2.打開軟件：雙擊液相色譜儀的工作站軟件圖標，進入軟件操作界面。

三、系統(tǒng)初始化和平衡

1.沖洗系統(tǒng)：

在儀器操作界面中設(shè)置泵的參數(shù)，用甲醇或其他合適的溶劑作為初始流動相，以一定的流速沖洗整個液相色譜系統(tǒng)，包括泵、管路、進樣閥、色譜柱和檢測器等。

沖洗時間一般為20~30分鐘，目的是去除系統(tǒng)中的雜質(zhì)和殘留物質(zhì)，同時檢查系統(tǒng)是否存在漏液等問題。

2.設(shè)置柱溫：

根據(jù)實驗要求，在柱溫箱上設(shè)置合適的溫度，使色譜柱達到穩(wěn)定的工作溫度。

柱溫的設(shè)置需要考慮色譜柱的類型、樣品的性質(zhì)以及分析方法的要求。

3.基線穩(wěn)定：

在沖洗過程中，觀察檢測器的信號，等待基線穩(wěn)定。基線穩(wěn)定的標準通常是基線的波動在一定范圍內(nèi)，且在一段時間內(nèi)保持相對穩(wěn)定。

這可能需要30分鐘或更長時間，具體取決于儀器的狀態(tài)和分析方法。

四、方法設(shè)置

1.泵參數(shù)設(shè)置：設(shè)置流動相的流速、比例等參數(shù)。如果是梯度洗脫，還需要設(shè)置梯度程序，即不同時間點流動相的組成變化。

2.檢測器參數(shù)設(shè)置：設(shè)置檢測波長、帶寬、響應(yīng)時間等參數(shù)。根據(jù)樣品的特性和分析目的選擇合適的檢測波長，以獲得檢測效果。

3.其他參數(shù)設(shè)置：根據(jù)實驗需求，還可以設(shè)置其他相關(guān)參數(shù)，如柱溫箱的溫度控制程序、數(shù)據(jù)采集的頻率等。

五、進樣分析

1.進樣前準備：

如果是自動進樣器，將樣品瓶放入自動進樣器的樣品架上，并在軟件中設(shè)置好樣品信息。

如果是手動進樣器，用洗針液洗凈進樣針，再用樣品溶液潤洗進樣針3遍以上，并排除針筒中的氣泡。

2.進樣操作：

對于自動進樣器，在軟件中點擊開始進樣按鈕，自動進樣器會按照設(shè)定的程序進行進樣。

對于手動進樣器，將進樣針插入進樣閥的進樣口，緩慢注入樣品溶液，然后切換進樣閥的位置，啟動進樣程序。

進樣完成后，記錄樣品的名稱、進樣時間等信息。

六、數(shù)據(jù)處理和分析

1.數(shù)據(jù)采集：在進樣后，液相色譜儀會自動采集樣品的色譜數(shù)據(jù)，并將其傳輸?shù)接嬎銠C上的工作站軟件中。

2.數(shù)據(jù)處理：對采集到的數(shù)據(jù)進行處理，包括積分、峰識別、峰面積計算、保留時間確定等?？梢愿鶕?jù)需要設(shè)置積分參數(shù)、峰的判定標準等，以獲得準確的分析結(jié)果。

3.數(shù)據(jù)分析：根據(jù)處理后的數(shù)據(jù)，對樣品的組成、含量、純度等進行分析和判斷。可以通過比較樣品的色譜圖與標準品的色譜圖，或者使用標準曲線法等方法進行定量分析。

七、實驗結(jié)束后的處理

1.樣品處理：取出樣品瓶，將剩余的樣品進行妥善處理，如回收、廢棄等。

2.系統(tǒng)清洗：

用適當?shù)娜軇ㄈ缂状?、水等）沖洗液相色譜系統(tǒng)，特別是泵、進樣閥和色譜柱等部件，以去除殘留的樣品和流動相。

清洗時間一般為30分鐘以上，確保系統(tǒng)清洗干凈。如果使用過含鹽緩沖液，則必須先用清水沖洗泵15分鐘，再沖洗干凈系統(tǒng)內(nèi)其他含鹽的部位，最后用純的強溶劑沖洗整個系統(tǒng)以保護色譜柱。

八、關(guān)機

1.先關(guān)閉液相色譜儀的軟件。

2.依次關(guān)閉檢測器、泵、柱溫箱等模塊的電源。

3.關(guān)閉計算機。

請注意，不同型號的液相色譜儀可能在操作細節(jié)上存在差異，因此在實際使用時，建議參考具體儀器的說明書或咨詢儀器供應(yīng)商以獲取準確的操作指導(dǎo)。