流式細胞分選技術實驗服務

一.服務介紹

流式細胞分選技術是利用流式細胞分選儀。以高能量激光照射高速流動狀態(tài)下被熒光色素染色的單細胞或微粒，測量其產生的散射光和發(fā)射熒光的強度，從而對細胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態(tài)等進行定性或定量檢測的一種現代細胞分析技術，它可根據發(fā)射光的熒光強度和波長將發(fā)光顆粒亞群分開并可實現單克隆分選，能復雜樣本中的細胞進行鑒定、分類.定量和分離，單次可同時對其中-種到四種特定細胞進行超高速分選純化、高通量單克隆分選或細胞芯片制備。分選后的細胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細胞PCR擴增或原位雜交等，可進一步進行細胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細胞之間的差異化研究。硬件中樣本細胞丟棄的比例低于5%，保證樣本中目標細胞的高回收率。

二、實驗原理

當經熒光染色或標記的單細胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內。流動室內充滿鞘液,在鞘液的包裹和推動下，細胞被排成單列，以-定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體， 充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負不同的電荷，當液滴流經過帶有幾千伏的偏轉板時，在高壓電場的作用下偏轉，落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現細胞的分離。

三、實驗流程(以分選有核紅細胞為例)

1采抗凝血10 ml。

2.密度梯度分離單個核細胞層

(1)在短中管中加入適量淋巴細胞分離液。

(2)取肝素抗凝靜脈血與等量Hank's液或RPM11640充分混勻，用滴管沿管壁緩慢疊加于分層液面上,注意保持清楚的界面。水平離心2000 rpmx20分鐘。

(3)離心后管內分為三層，上層為血漿和Hank's液， 下層主要為紅細胞和粒細胞。中層為淋巴細胞分離液，在上、中層界面處有一-以單個核細胞為主的白色云層狹窄帶，單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞。此外， 還含有血小板。

(4)用毛細血管插到云霧層，吸取單個核細胞。置入另-短中管中,加入5倍以上體積的Hank's液或RPMI1640, 1500rpmx10分鐘，洗滌細胞兩次。

3.免疫熒光染色

將上一步得到的單個核細胞層按1x10/1的比例加入異硫青酸(FITC)標記的CD71單克隆抗體(鼠IgM).孵育30 min后重懸于0.5 ml PBS液中進行熒光染色。

4.FACS分選CD71陽性細胞。

四、服務說明

1.客戶提供血液樣本。

2.公司提供圖片和分離后的細胞。

3.實驗周期為2周左右，具體根據實驗內容而定。

五、質量承諾

提供清晰的圖片和分選后的細胞。

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