生物磁珠通常是表面帶有特定化學(xué)功能基團(tuán)的具有細(xì)小粒徑的超順磁微球,通常用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中的樣本處理。這些磁珠的設(shè)計(jì)目的是為了在磁場(chǎng)中能夠迅速聚集,而在沒有磁場(chǎng)的情況下又能均勻分散,這種特性使得它們非常適合用于生物分子(如蛋白質(zhì)、核酸等)的分離和純化。
硅羥基核酸提取磁珠結(jié)構(gòu)圖
磁珠在核酸提取過程中的工作原理主要包括以下幾個(gè)步驟。
一、裂解
在核酸提取的初期階段,樣本(如血液、組織、細(xì)胞等)會(huì)被加入到含有裂解液的反應(yīng)體系中。裂解液含有強(qiáng)力的蛋白質(zhì)變性劑,能夠破壞細(xì)胞或病毒的結(jié)構(gòu),使核酸從細(xì)胞或病毒顆粒中釋放出來(lái)。
二、結(jié)合
核酸被釋放后,磁珠被加入到反應(yīng)混合物中。這些功能基團(tuán)在一定的鹽濃度和其他條件(如pH值)下,可以與核酸(DNA或RNA)通過靜電作用、疏水作用和氫鍵等方式結(jié)合。這樣,核酸就被吸附到了磁珠的表面。
三、洗滌
利用磁珠的磁性,通過外加磁場(chǎng)可以將吸附了核酸的磁珠從液體中分離出來(lái)。接著,通過洗滌步驟去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)、酶以及其他雜質(zhì)。對(duì)于不同樣本中,可能含有不同類型的污染物,去除特定不同類型的污染物需要選擇不同類型的洗滌液。
四、洗脫
最后一步是洗脫,通過改變條件(如降低鹽濃度或改變pH值),可以使核酸從磁珠表面釋放。洗脫液通常是適合核酸溶解的緩沖液,如TE緩沖液或純水。這樣,就能獲得純化的核酸,供進(jìn)一步的分子生物學(xué)分析使用。
磁珠法核酸提取的優(yōu)點(diǎn)在于其高效性、可控性和自動(dòng)化潛力,它不僅可以減少人工操作帶來(lái)的誤差,還能確保核酸提取的質(zhì)量,并且適用于各種樣本類型和大規(guī)模自動(dòng)化處理。
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